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Bienvenue à la série visuelle Protocole Novus.
Dans cette vidéo, vous allez apprendre à effectuer toutes les phases du fluorescente
immunocytochimie en utilisant les méthodes les plus courantes pour ce dosage.
Avant de commencer la procédure de la CPI,
nous allons montrer comment préparer des lamelles et des plaques de culture cellulaire
suivi par le placage de nos cellules.
Nous commençons par traitement à l'acide lamelles de nouvelles molaire d'acide chlorhydrique pour
24 heures.
Après avoir soigneusement décanter l'acide et l'enlèvement des lamelles de verre,
nous nous lavons chacune avec de l'eau distillée
puis un rinçage final avec de l'éthanol.
En option, vous pouvez placer les lamelles de plonger dans un support sous-jacente
dans un 0,1 mg / ml de solution de gélatine ou la polylysine
pour cinq minutes.
Ces revêtements en aide fournissant une adhérence supplémentaire de cellules à l'
lamelles de veiller à ce qu'elles ne se détachent pas pendant les étapes de lavage ultérieures.
Après le traitement retirer la grille sous-jacente et sécher les lamelles dans la culture
hotte ou dans un four chauffé.
Nettoyer les lamelles sèches sont ensuite insérées dans chaque puits d'une culture de six puits
plaque
et recouvert d'un couvercle.
Pour gagner du temps, d'importants volumes de plaques peuvent être préparés à l'avance pour une utilisation ultérieure.
Les plaques peuvent également être stérilisés en les plaçant sous la lumière UV de la hotte.
Avec des lamelles blanches préparées en six plaques ainsi, nous pouvons maintenant ajouter nos cellules.
Platted ici dans les cellules ajoutez une densité d'un demi-million de cellules par puits.
Les cellules sont ensuite cultivées pendant une nuit dans un incubateur ou jusqu'à ce qu'ils atteignent votre préféré
densité.